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      產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

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      RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲存液

      簡(jiǎn)要描述:

      RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲存液公司正在出售的產(chǎn)品:鴨胚肝間質(zhì)細胞(永生化) G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體p2y12封閉多肽 滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒 大鼠膠原酶I(Collagenase I)ELISA檢測試劑盒 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)酶活性比色法檢測試劑盒 ?,F青霉 卷曲螺旋結構域蛋白25抗體

      更新時(shí)間:2024-01-12

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      RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲存液

      商品屬性:

      產(chǎn)品名稱(chēng)

      規格

      貨號

      RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲存液

      100ml

      A-Hc2011


      保存條件:

      室溫(18-25℃)保存1 年以上,如果使用時(shí)發(fā)現有沉淀或者析出,可以37℃水浴加熱重新溶解后使用,重新溶解后不會(huì )影響產(chǎn)品質(zhì)量。
      產(chǎn)品介紹:
      RNAfixer 是一種液態(tài)的無(wú)毒的組織保存液體,可以迅速滲入新鮮組織細胞的胞漿中,在非凍狀態(tài)下原位穩定和保護細胞內的RNA。取下組織薄片后立刻浸入RNAfixer 保存并不影響將來(lái)提取RNA 的質(zhì)量和數量。RNAfixer 消除了RNA 樣品需要立刻處理或者必須液氮保存的不方便。浸入RNAfixer 后,新鮮組織細胞中RNA 可以完好的在37℃下保存一天,在25℃下保存一周,4℃下保存一個(gè)月,在-20℃或-80℃下長(cháng)期保存。
      RNA 病毒樣品(如HCV 和HIV)可在37℃保存一個(gè)月。適用于動(dòng)物組織(心、肝、腎、肌肉、睪丸、腦、脾等)、培養細胞、RNA 病毒、 果蠅、細菌、白細胞、一些植物組織等。
      產(chǎn)品特點(diǎn):
      1.操作容易:將組織成適當大小,浸沒(méi)在RNAfixer 中即可使其RNA 不被降解。
      2.無(wú)需液氮:使樣品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其適用于臨床和野外樣品的快速和大規模采集。
      3.方便運輸:處理過(guò)的樣品能在25℃保存一周,使樣品郵寄和運輸變得容易和便宜,有利學(xué)術(shù)合作和交流。
      4.多次凍融: 經(jīng)RNAfixer 處理的樣品可反復凍融多次, 其間可對樣品進(jìn)行各種處理而不影響最終提取的RNA 的質(zhì)量。
      5.可比性強: RNAfixer 能減少大規模樣品處理中的誤差,增加各次實(shí)驗數間的可比性, 對大規?;虮磉_譜的分析尤其有用。
      使用說(shuō)明:
      RNAfixer 只用于新鮮組織,浸泡入 RNAfixer 前禁止冷凍組織。只需要迅速將新鮮組織成長(cháng)、寬,高任意一邊厚度<0.5 厘米浸泡入 RNAfixer 即可(只要有一邊厚度不超過(guò) 0.5 厘米,RNAfixer 可以迅速滲透,其它兩邊的尺寸并不重要)。將新鮮組織浸泡 在 5 倍體積的 RNAfixer 中,按照指示存放在適當的溫度。
      1.動(dòng)物組織 RNAfixer 并不破壞或者溶解組織結構,因此浸泡在 RNAfixer 中達到滲透平衡的組織 可以從 RNAfixer 中取出,然后切成更小的塊,然后放回到 RNAfixer 中下次繼續使用。小器官如小鼠肝、腎、脾不需要剪切,可以完整的存放在 RNAfixer 中。
      推薦不同組織樣品的 RNAstore 使用量:
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       2.植物組織很多植物組織直接浸泡入 RNAfixer 即可,有的植物有天然滲透屏障如臘質(zhì)保護層,需要先破壞掉臘質(zhì)層,便于 RNAfixer 滲透。
      3.組織培養細胞細胞吹打下來(lái)后,離心收集細胞,棄上清,用冰浴的 PBS 緩沖液洗一次去除殘留培養液。將細胞懸浮在少量 PBS 緩沖液中。加入五到十倍體積 RNAfixer, 混均。
      4.白細胞對于全血中白細胞的保存,需將白細胞從紅細胞和血清中分離出來(lái),并按組織培養細胞一樣處理后,白細胞便能有效地保存在 RNAfixer 中。不要將全血、血漿或血清中的 RNA 保存在 RNAfixer 中,因為它們蛋白含量過(guò)高,與 RNAfixer 混合后易形成不溶的沉淀。
      5.細菌
      細菌并不能在 RNAfixer 中生長(cháng),但是 RNAfixer 并不破壞細菌,E. coli 在 4℃保存一個(gè)月仍舊可以提出完整的 RNA。
      RNAfixer 中樣本的存放:
      1.存放在-80℃樣品長(cháng)期保存用。將 RNA fixer 中樣本放置于 4℃過(guò)夜,然后將樣本撈出,盡量去除干凈 RNAfixer 液體,然后放置于-80℃。對于組織培養細胞,則不需要去除RNAfixer,直接冷凍于-80℃,并不會(huì )裂解細胞。樣品使用時(shí)可以在室溫融化,并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
      2.存放在-20℃將 RNAfixer 中樣本放置于 4℃過(guò)夜,然后轉移到-20℃。在-20℃樣品并不會(huì )被冰凍,但是可能會(huì )形成一些結晶,這并不會(huì )影響將來(lái)的 RNA 提取。樣品使用時(shí)可以在室溫 融化,并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
      3.存放在 4℃樣本可以在 4℃存放一個(gè)月。
      4.存放于 25℃存放于 25℃樣本的 RNA 在一周內保持完整,保存兩周的樣品 RNA 有輕微降解,勉強能用于northern analysis, 但是質(zhì)量足夠用于nuclease protection assay or RT-PCR 。
      5.存放于 37℃存放于 37℃樣本的 RNA 在 24 小時(shí)內保持完整,3 天的時(shí)候有部分降解。RNAfixer 保存樣本的 RNA 提?。?/span>將樣本從 RNAfixer 中取出,RNAfixer 可以直接倒入水池,用自來(lái)水沖即可,不需特殊處理。
      1.組織
      用干凈鑷子將樣本從 RNAfixer 中撈出,用吸水紙稍稍吸去殘留的 RNAfixer 后,可以和新鮮組織一樣按照液氮研磨,然后勻漿處理的標準程序進(jìn)行提取 RNA。
      2.細胞
      對于儲存在 RNAfixer 中的細胞有兩種選擇。一是去除 RNAfixer 后提取 RNA, 另一個(gè)是直接從細胞和 RNAfixer 的混合物提取。
      1)去除 RNAfixer 后提取 RNA存放于 RNAfixer 中的細胞變得不那么脆弱,可以承受較高的離心速度而不被裂解。 我們有在 5000g 離心成功收集細胞的經(jīng)驗,由于每種細胞的強度不一樣,可以先用不重要的細胞做個(gè)預試驗,以保證在使用的速度下離心不會(huì )破壞細胞。另一個(gè)選擇是在離心前加等體積的 PBS 稀釋 RNAfixer 和細胞的混合物,以減少溶液的密度,使細胞溶液可以沉淀下來(lái)。
      2)不去除 RNAfixer,直接提取 RNA
      也可以直接加 10 倍體積的一步法提取試劑(如 TRIpure,TRI reagent)到細胞和RNAfixer 的混合物,然后按照正常步驟操作。

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      PCR基本步驟及注意事項?

      一、實(shí)驗原理

      PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類(lèi)似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類(lèi)似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實(shí)現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個(gè)反應的緩沖環(huán)境;反應過(guò)程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開(kāi),引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過(guò)程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過(guò)控制反應溫度實(shí)現的。如常用94℃變性模板DNA打開(kāi)雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過(guò)程即可實(shí)現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開(kāi)始才產(chǎn)生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進(jìn)一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區段的指數加倍。

      在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來(lái)呈指數擴增的反應變成平坦的曲線(xiàn),產(chǎn)物不再隨循環(huán)數而明顯上升,這稱(chēng)為平臺效應。平臺期(Plateau)會(huì )使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環(huán)次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產(chǎn)物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數取決于樣品中模板的拷貝。

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      二、主要的成分

      1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類(lèi)型的模板,其主要不同在于預變性的時(shí)間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時(shí)間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產(chǎn)物預變性2min即可。

      注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過(guò)在第一輪循環(huán)時(shí)只有一個(gè)引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開(kāi)始,兩個(gè)引物均與特異位點(diǎn)結合,從而實(shí)現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進(jìn)行PCR擴增,原因就在于實(shí)現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

      2.對于模版的量來(lái)說(shuō),一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過(guò)大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進(jìn)行梯度稀釋。否則濃度過(guò)高則可能會(huì )引起非特異性擴增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結構簡(jiǎn)單,且提取濃度一般較低,則無(wú)需稀釋。

      公司正在出售的產(chǎn)品:

      產(chǎn)色葡萄球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

      二羥基賴(lài)正己氨酸ELISA試劑盒 DHLNL免費代測試劑

      甲型流感(感)病毒H5亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

      地榆染料法PCR鑒定試劑盒

      表皮角蛋白ELISA試劑盒 EK免費代測試劑

      單純皰疹病毒1型PCR檢測試劑盒直銷(xiāo)

      傷寒桿菌PCR檢測試劑盒

      補體成分1sELISA試劑盒

      南非諾卡菌PCR檢測試劑盒

      狄斯瓦螨PCR檢測試劑盒

      補體1抑制物抗體-IgGELISA試劑盒

      納氏蟲(chóng)屬通用·染料法熒光定量PCR試劑盒

      連翅探針?lè )?/span>PCR鑒定試劑盒

      超敏熱休克蛋白60ELISA試劑盒

      類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      犬腺體病毒1型(犬傳染性肝炎病毒)探針?lè )晒舛縋CR試劑盒

      叢狀蛋白A2ELISA試劑盒

      乙型肝炎病毒耐藥PCR檢測試劑盒

      犬源性成分(Canine)核酸檢測試劑盒

      單純皰疹病毒Ⅱ型抗體IgMELISA試劑盒

      牛茨城病病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

      利什曼原蟲(chóng)通用探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      蛋白C抑制因子ELISA試劑盒

      馬立克氏病病毒2型PCR檢測試劑盒

      立克次氏體通用PCR試劑盒

      蛋白酪磷酸酶樣蛋白AELISA試劑盒

      蜜蜂微孢子蟲(chóng)通用PCR檢測試劑盒直銷(xiāo)

      犬鏈球菌探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      動(dòng)力蛋白激活蛋白3ELISA試劑盒

      耐萬(wàn)古腸球菌PCR檢測試劑盒

      柯薩奇病毒 A2 型 / 柯薩奇病毒 A4 型核酸檢測試劑盒( 雙重熒光 PCR 法 )

      人核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒

      牛附紅細胞體探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      禽病毒H10N8亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

      人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)檢測試劑盒elisa

      禽腺病毒C型探針?lè )晒舛縋CR試劑盒

      RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲存液鵪鶉奇異線(xiàn)蟲(chóng)探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      人鈣聯(lián)蛋白(calnexin)試劑盒ELISA

      黃綠青霉探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      產(chǎn)酸克雷伯菌PCR檢測試劑盒

      MAX二聚化蛋白1(mxd1)試劑盒 ELISA

      熱帶念珠菌探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      豌豆內源基因PCR檢測試劑盒

      人白介素33(IL-33)ELISA試劑盒

      牛分枝桿菌卡介苗探針?lè )晒舛?/span>PCR試劑盒

      PCR實(shí)驗中應該注意的問(wèn)題有哪些?

      沒(méi)有ct

      檢測結果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問(wèn)題:

      1、循環(huán)數不夠(一般不超過(guò)45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

      2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,TaqMan法則一般在退火結束時(shí)或延伸時(shí)采集信號,另外熒光采集是否選中;

      3、引物或探針降解??赏ㄟ^(guò)PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

      4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過(guò)500ng,根據試劑盒說(shuō)明書(shū)即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

      5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過(guò)4℃以上也會(huì )影響擴增)。

      ct值過(guò)晚

      在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會(huì )增大, 但是一般不宜超過(guò)40循環(huán), 否則定量不準確。

      因此,判斷Ct值出現過(guò)晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實(shí)驗設計和目的進(jìn)行。

      1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進(jìn)行優(yōu)化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

      2、PCR程序不合適, 改用三步法進(jìn)行反應, 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時(shí)間短(可以在推薦的時(shí)間條件下延長(cháng)10s);

      3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

      4、PCR產(chǎn)物太長(cháng)。PCR產(chǎn)物設計超過(guò)500bp;

      5、模板中存在抑制物。用高純度模板進(jìn)行PCR檢測或將模板進(jìn)行稀釋。



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