細胞周期是指細胞從一次分裂結束起到下一次分裂結束為止的活動(dòng)過(guò)程，分為間期與分裂期兩個(gè)階段。如下圖：

G0期：這一期的細胞稱(chēng)為休眠細胞，細胞暫時(shí)脫離分裂周期,不進(jìn)行DNA復制和分裂。但這些細胞可在某些條件的誘導下可重新開(kāi)始DNA合成, 進(jìn)行細胞分裂。

G1 期：主要合成RNA、核糖體、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)和碳水化合物。

S期：這個(gè)時(shí)期主要合成DNA, 同時(shí)還會(huì )合成組蛋白, DNA復制所需的酶都在這一時(shí)期合成。

G2期：DNA合成后期。主要大量合成ATP、RNA、蛋白質(zhì), 包括微絲微管蛋白。

M期：RNA合成停止, 蛋白質(zhì)合成減少, 染色體高度螺旋化。

細胞周期檢測的原理：

PI法是經(jīng)典的周期檢測方法，PI是碘化丙啶(Propidium)，一種雙鏈DNA的熒光染料，碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可產(chǎn)生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據DNA含量的分布情況，可進(jìn)行細胞周期和細胞凋亡分析。

通常正常細胞的G0/ G1 期具有二倍體細胞的DNA含量(2N)，G2/ M 期具有四倍體細胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于2N和4N之間。細胞用冰乙醇固定通透后，PI可以與細胞的DNA結合，其熒光強度直接反映了細胞內DNA含量。

因此，可以通過(guò)流式細胞內DNA含量進(jìn)行檢測，將細胞周期區分為G1/G0 期，S 期和G2/M 期,并可得出各個(gè)時(shí)期細胞百分數。

細胞周期檢測實(shí)驗流程：

收集細胞：A: 收集細胞5~20×105于離心管中，若細胞比較小(如淋巴細胞)400 g離心，若細胞比較大(如腫瘤細胞)300 g離心，5~10 min，棄去培養液;

洗滌：加入1 ml冷PBS(提前放4℃預冷)洗滌1次，離心棄去上清;

固定前處理：利用管底殘留的液體，輕彈管底，將沉淀重懸成細胞懸液，避免細胞成團;

細胞固定：加入約1 ml -20℃預冷的無(wú)水乙醇中，輕輕吹打混勻，-20℃固定1 h或過(guò)夜;

洗滌：加入1 ml冷PBS(提前放4℃預冷)洗滌1次，300 g離心10min，棄去上清;

RNA酶消化：300 g 離心 5 min，吸盡上清后，加入 100 μL 的 RNase A 并充分懸浮細胞，37°C 水浴 30 min。

PI染色：加入400μL的PI溶液并充分混勻，4℃避光孵育30 min;

上機檢測：用流式細胞儀在激發(fā)波長(cháng)488nm波長(cháng)處檢測紅色熒光，低速獲取細胞，采用分析軟件進(jìn)行DNA含量分析。

細胞周期檢測注意事項：

1、培養細胞注意無(wú)菌環(huán)境。

2、染液等物質(zhì)有一定毒性，注意防護。

3、本實(shí)驗上機檢測所需收集細胞量較多，收集細胞時(shí)盡量多收集一些。

4、本實(shí)驗對細胞離心，重懸次數較多，注意動(dòng)作輕緩，避免過(guò)多地損傷細胞。

5、固定時(shí)必須預冷PBS重懸打入無(wú)水乙醇中，二者順序不可顛倒。

6、培養細胞時(shí)，以對數期處理為宜，避免細胞量過(guò)少導致收集細胞量不足或者細胞量過(guò)多導致細胞開(kāi)始大量死亡造成的實(shí)驗誤差。

7、固定后細胞雖然可以保存較長(cháng)時(shí)間后再上機檢測，為避免不可控因素影響最好及早上機檢測。